詳細介紹
胞質注射是顯微注射技術的一種,通過顯微操作系統將外源基因直接注入細胞質(而非細胞核),實現基因導入。其核心機制包括:
非整合性表達:外源DNA以游離體形式存在,通過細胞自身轉錄機制表達,不整合至宿主基因組(區別于原核注射的隨機整合)。
適用性廣:可操作單細胞(如原代細胞、干細胞)及多細胞胚胎(如2細胞期胚胎)。
瞬時表達為主:外源基因隨細胞分裂逐漸丟失,表達周期較短(通常<72小時)。
生物學基礎:
依賴細胞質內的轉錄因子與RNA聚合酶完成外源基因表達,無需核定位信號(NLS)介導。
組件 | 參數要求 | 功能說明 | 引用來源 |
---|---|---|---|
顯微操作系統 | 微操縱器精度0.1μm,注射針內徑<0.5μm | 精準控制注射位置與深度 | |
外源DNA溶液 | 濃度1-5 ng/μL,溶于低離子強度緩沖液(如TE) | 減少細胞毒性,提升表達效率 | |
靶細胞類型 | 原代角質形成細胞、HEK-293T、早期胚胎等 | 需具備較強DNA攝取與表達能力 |
關鍵參數:
注射壓力:5-10 hPa(過高導致細胞破裂)。
注射時長:單細胞≤30秒,避免細胞脫水。
存活率控制:熟練操作下細胞存活率>80%,胚胎存活率>70%。
熒光標記法:
注射含GFP/RFP報告基因的載體,24小時后熒光顯微鏡觀察。
蛋白檢測法:
Western Blot或免疫組化檢測目標蛋白表達。
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