相關文章
Related Articles詳細介紹
ES打靶技術是一種基于胚胎干細胞(Embryonic Stem Cells, ES)同源重組的基因編輯方法,通過將外源DNA定點整合至基因組特定位置,實現基因敲除(KO)、條件性敲除(CKO)、基因敲入(KI)及點突變(PM)等精準修飾。其核心原理包括:
同源重組機制:
設計包含同源臂(與靶基因同源)的載體,通過同源重組將外源序列(如篩選標記基因)插入目標位點。
正負篩選系統:
正篩選標記(如Neo?):插入同源區,篩選成功重組的ES細胞。
負篩選標記(如HSV-tk/DTA):位于同源臂外側,淘汰隨機插入的細胞。
胚胎干細胞全能性:
修飾后的ES細胞注入囊胚,發育為嵌合體小鼠(F0),通過生殖系傳遞獲得穩定遺傳模型。
技術定位:ES打靶是CRISPR前時代的金標準,尤其適用于大片段編輯(>10 kb)和復雜基因修飾(如條件性敲除)。
關鍵步驟解析:
載體構建:
同源臂長度通常為3-5 kb,大片段插入需BAC載體。
ES細胞系選擇:
常用品系:129S6/SvEvTac(高重組效率)、C57BL/6N(背景純凈)。
嵌合體制備:
囊胚注射后嵌合率約20-70%,需通過毛色標記(如白化宿主)直觀篩選。
EPS細胞(Extended Pluripotent Stem Cells)由我國科學家于2017年shou次報道,其優勢包括:
效率提升:
打靶效率達傳統ES細胞的10-100倍。
周期縮短:
嵌合體一步獲得,省去3個月種系傳遞。
全能性增強:
單細胞注入囊胚即可生成100%嵌合體。
產品咨詢