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簡要描述：KO first小鼠動(dòng)物模型是一種多用途的條件基因敲除模型。該模型構(gòu)建時(shí)，會(huì)利用基因編輯技術(shù)在目的基因的兩側(cè)插入方向相同的 LoxP 位點(diǎn)，并在靶片段 5' 端內(nèi)含子中放置一個(gè)兩側(cè)帶有 FRT 位點(diǎn)的 SA-IRES-reporter 片段，同時(shí)在目的基因敲除的外顯子兩側(cè)各插入一個(gè) LoxP 位點(diǎn)。
更新時(shí)間：2025-06-26瀏覽次數(shù)：435相關(guān)文章
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KO first（又稱Conditional Ready）是一種多用途基因敲除模型，通過雙重組系統(tǒng)（Cre/loxP + Flp/FRT）實(shí)現(xiàn)基因功能的靈活調(diào)控。其核心目標(biāo)是為同一基因提供兩種研究路徑：
全身性敲除（KO） ：yong久性失活靶基因，同時(shí)啟動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)。
條件性敲除（cKO）轉(zhuǎn)換：通過重組獲得Flox小鼠，用于組織特異性基因敲除。
| 組件 | 功能 | 位置 |
|---|---|---|
| 同向loxP位點(diǎn) | 被Cre重組酶識別，介導(dǎo)片段切除 | 靶基因關(guān)鍵外顯子兩側(cè) |
| FRT-flanked 盒 | 含SA-IRES-reporter（報(bào)告基因）和Neo（抗性基因） | 靶基因5'端內(nèi)含子 |
通過CRISPR/Cas9技術(shù)將上述結(jié)構(gòu)插入小鼠基因組，獲得floxed報(bào)告基因小鼠（即KO first基礎(chǔ)品系）。
關(guān)鍵操作說明：
Cre介導(dǎo)重組：切除Neo基因及floxed區(qū)域，使報(bào)告基因受內(nèi)源啟動(dòng)子調(diào)控（用于基因表達(dá)定位）。
Flp介導(dǎo)重組：移除SA-IRES-reporter盒，保留兩側(cè)loxP位點(diǎn)，生成傳統(tǒng)Flox小鼠。
Fbn1-KO：敲除exon 65-66的凍存品系，需避免胚胎致死。
Prps1-KO：敲除exon 2的C57BL/6Smoc品系。
| 應(yīng)用方向 | 實(shí)現(xiàn)方式 | 案例 |
|---|---|---|
| 全身性功能缺失 | 直接使用KO first品系 | Oprm1-KO研究多巴胺系統(tǒng) |
| 時(shí)空特異性敲除 | 轉(zhuǎn)換為Flox后交配組織特異性Cre | 神經(jīng)元Tau敲除（阿爾茨海默病） |
| 基因表達(dá)動(dòng)態(tài)追蹤 | 報(bào)告基因可視化（如GFP/LacZ） | 通過SA-IRES-reporter定位靶基因表達(dá)域 |
免疫介導(dǎo)疾病：
α-Gal KO小鼠評估xin臟瓣膜鈣化，抗Gal抗體滴度提升2倍，鈣沉積量增加4倍。
神經(jīng)系統(tǒng)疾病：
Cnr1-KO用于抑郁癥及癲癇研究。
多基因協(xié)同調(diào)控：通過Flp/Cre系統(tǒng)構(gòu)建多基因cKO，模擬復(fù)雜疾病（如腫瘤微環(huán)境）
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