線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理

 JC-1是一種碳氰化合物類(lèi)陽(yáng)離子熒光染料，可作為檢測(cè)線(xiàn)粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細(xì)胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當(dāng)JC-1 濃度低或膜電位水平低時(shí)，主要以單體形式存在，激發(fā)波長(zhǎng)為527nm，呈綠色熒光；當(dāng)JC-1濃度升高或線(xiàn)粒體膜電位水平較高時(shí)，形成聚合物，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長(zhǎng)為590nm。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，線(xiàn)粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線(xiàn)粒體內(nèi)釋放，紅光強(qiáng)度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位的變化。

線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程

1. 細(xì)胞培養(yǎng)；

2. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)設(shè)立陰性依照組合陽(yáng)性對(duì)照組，收集細(xì)胞；

3. 用PBS洗滌細(xì)胞三次，收集不多于1×106的細(xì)胞；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL**去離子水稀釋成1×Incubation Buffer，混勻并預(yù)熱至37℃；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液；

6. 取500 μL JC-1工作液將細(xì)胞均勻懸浮，37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。

7. 室溫離心（2000rpm,5min）收集細(xì)胞，用1×Incubation Buffer洗兩次；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細(xì)胞；

9. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)，分析。

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實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報(bào)告

實(shí)驗(yàn)周期：1-2周，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。